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毛細管電泳中的分析化學發光/化學發光檢測

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D11. 毛細管電泳中的化學發光檢測

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毛細管電泳對極小樣品具有出色的分離能力,但這對檢測器提出了挑戰。與其他候選方法相比,化學發光檢測具有靈敏度高且裝置簡單、成本低廉的優勢。此外,它不受分離系統中高電壓的影響,而這對同樣靈敏的電化學檢測來說是一個特殊問題。紫外吸收檢測器也具有低成本且廣泛應用,但狹窄的毛細管使得難以獲得足夠長的光程。雷射誘導熒光具有高靈敏度,但裝置成本高,並且需要對非熒光分析物進行柱前或柱後衍生化。[1]

圖 D11.1 – 毛細管電泳與化學發光檢測之間的柱上同軸流介面(改編自參考文獻 D9.1)。

與 HPLC 一樣,分離所需條件與化學發光所需條件之間存在固有的相容性問題。此外,化學發光試劑的穩定性也存在潛在問題。透過使用柱後模式而不是柱前模式來解決這兩個問題。柱後接口是用於將洗脫液與化學發光試劑混合的裝置,為此目的,設計可以利用合併流、同軸流或儲液池混合。介面還可以根據檢測位置以及是否與用於毛細管電泳的高壓電源隔離,分為柱外、柱上或柱端介面。

最簡單的介面,即柱外合併流,並沒有得到廣泛的應用。緩衝液從一個儲液器流過分離毛細管,並在色譜柱末端的四通接頭處與試劑合併。出口臂將混合物輸送到化學發光反應線圈和緊鄰光電倍增管的流通池,而第四個臂透過半透膜連線到合併點下游的第二個緩衝液儲液器(包含接地電極)。這種佈置將高壓與檢測區域隔離。

相反,柱上同軸流介面已被證明對大量應用有效。[2] 圖 D11.1 顯示檢測器位於毛細管出口尖端,因此檢測是“柱上”的。接地電極位於流出液儲液器中,以便在高壓區域內進行檢測。分離毛細管出口同軸插入反應管,從而使湍流最小化並實現可重複的混合。

參考文獻
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  1. Huang X-J 和 Fang Z-L,Anal. Chim. Acta,2000,414,1-14。
  2. Dadoo R、Colon L A 和 Zare J,J.High Resol. Chromatogr.,1992,15,133。
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