高效液相色譜中的化學發光/分析化學發光檢測

D10. 高效液相色譜中的化學發光檢測

圖 D10.1 - 高效液相色譜與化學發光檢測流程圖。

高效液相色譜包括將液體樣品注入流動相，流動相透過填充固體或支援液體固定相的色譜柱。分離是由於固定相和流動相之間以及樣品中分離組分的分配、吸附、尺寸排阻或離子交換導致的，分離後的組分通常由紫外吸收檢測器檢測。圖 D10.1 展示了典型儀器使用的流程圖。

與化學發光檢測相結合，將這種技術的高靈敏度與強大的分離方法的選擇性結合在一起。它需要測量色譜柱洗脫液中分析物與化學發光試劑之間柱後反應產生的發射光，化學發光試劑由額外的泵輸送，並結合快速混合裝置。在最大化學發光強度處進行測量需要最佳化混合點和檢測器之間的傳輸時間（取決於管路的長度和流速）。在設計耦合儀器時，最重要的是確保高效色譜分離所需的條件與強化學發光所需的條件之間的相容性。分離很大程度上取決於流動相的組成，而化學發光發射已知受溶劑、pH、反應溫度以及增強劑和/或催化劑的存在的影響。

圖 D10.2 - 分析物衍生化後測量化學發光的柱後儀器（PMT = 光電倍增管；REC = 記錄儀）。

色譜柱與化學發光之間的介面可能非常複雜。例如，過氧化草酸酯化學發光經常與 HPLC 耦合。由於它只檢測熒光分析物（見 B5 章），因此成功的檢測取決於在新增化學發光試劑之前對從色譜柱洗脫的分析物進行衍生化。圖 D10.2 顯示了用於用過氧化草酸酯化學發光測定兒茶酚胺的部分柱後裝置，該裝置在與乙二胺反應後，產生了熒光衍生物。 為了簡單起見，系統不同部分的不同溫度的裝置沒有顯示。