分子克隆/DNA提取
從組織培養瓶中以單層培養的細胞或從處死動物的組織樣本（例如肝臟）中大規模分離基因組 DNA。簡而言之，在聚丙烯管中，向 10 毫升提取緩衝液（10 毫摩爾 Tris.Cl pH 8.0、0.1 毫摩爾 EDTA pH 8.0、20 微克/毫升胰蛋白酶 RNase、0.5% SDS）中加入 2.5 × 107 個 PCC4 細胞（用胰蛋白酶處理並懸浮在 TE pH 8.0 中）或 100 毫克組織（在液氮中冷凍並透過粉碎粉碎）。透過反轉將內容物完全混合，並在 37 攝氏度下孵育 1 小時。向裂解的細胞中加入 1 毫克蛋白酶 K，最終濃度為 100 微克/毫升（來自 20 毫克/毫升的儲備液），透過反轉輕輕混合，並在 37 攝氏度下孵育 3-5 小時或過夜，並在孵育過程中頻繁混合。蛋白酶 K 消化後，觀察到無碎片的粘性溶液。將溶液冷卻，加入等體積的三斯飽和酚，在旋轉扭矩上混合以混合兩相，然後在室溫下以 10,000g 離心 5 分鐘。使用帶有切斷尖端的 5 毫升移液管轉移上層無色的水相粘性相。水相進一步進行兩輪酚-氯仿提取和一輪氯仿提取。然後將水相轉移到乾淨的聚丙烯管中，加入 0.1 體積的 3 毫摩爾醋酸鈉（pH 4.2）和 2 體積的無水乙醇，在室溫下混合內容物。使用 1 毫升移液管尖端將基因組 DNA 沉澱物纏繞起來，並轉移到含有 70% 乙醇的 1.5 毫升 Eppendorf 管中，短暫離心。所得沉澱物用另外兩輪 70% 乙醇進一步洗滌，短暫風乾，加入 1 毫升新鮮的高壓滅菌水，並將樣品在 4 攝氏度下過夜，使基因組 DNA 溶解。在 0.7% 的瓊脂糖凝膠上檢查 DNA，總產量確定為 PCC4 細胞和組織的每種 100 微克。
提取緩衝液
10 毫摩爾 Tris.Cl pH 8.0,
0.1 毫摩爾 EDTA pH 8.0,
20 微克/毫升胰蛋白酶 RNase,
0.5% SDS