學校科學/氨基酸紙色譜
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這是一個關於如何使用氨基酸紙色譜(識別氨基酸)的描述。
- 演示氨基酸紙色譜分離
- 使用色譜法識別氨基酸
- 色譜槽和蓋
- 色譜紙(或濾紙),適合色譜槽
- 毛細管或巴氏吸管
- 1摩爾鹽酸中的氨基酸樣品(刺激性)
- 未知樣品(例如“未知”混合物或過濾後的果汁)
- 溶劑(BAW):丁醇:乙酸:水 60:15:25(易燃,有毒)
- 吹風機或加熱托盤
- 1%丁醇中茚三酮(茚三酮)噴霧罐(易燃,有毒)
- 乳膠手套
- 通風櫥
- 100℃乾燥箱
BAW溶劑應在當天新鮮配製
使用鉛筆,在色譜紙底部上方1.5-2釐米處輕輕畫一條線。沿線以1.5釐米的間隔做上小標記。
用毛細管或吸管透過毛細作用吸取你的第一個樣品。將毛細管的尖端接觸第一個標記,然後拉開。你應該留下一小點(大於5毫米)溼點。讓它乾燥,然後再次塗抹樣品。記下哪個樣品放置在哪個點上(你可以在標記下方的紙上用鉛筆輕輕寫上)。對每個樣品或混合物重複以上操作,使用不同的標記,每次使用新鮮的毛細管或吸管。讓紙張乾燥。
在色譜槽中加入1釐米或更少的BAW。樣品點不應浸入溶劑中。將色譜槽放在陰涼處,避免陽光直射。將色譜紙豎立在色譜槽中,使底部邊緣浸入溶劑中,但剩餘的紙張不要接觸色譜槽。蓋上色譜槽蓋,靜置約1小時。
戴上手套,取出潮溼的紙,標記溶劑到達的位置。在通風櫥中乾燥紙張。仍在通風櫥中,用丁醇中的茚三酮噴灑整個紙張。乾燥紙張,並將其轉移到乾燥箱中,烘乾1-2分鐘。
標記每個出現的點的的位置。記下每個標準的顏色和Rf(或遷移距離),從而找到未知樣品的氨基酸組成。
- 乙酸
- 刺激性氣體。皮膚接觸:用水沖洗。通風區域。
- 丁醇
- 高度易燃。移開點火源。
- 吸入有害。刺激性氣體。使用通風櫥。
- 1摩爾鹽酸
- 刺激性,可能導致灼傷。皮膚接觸:用水沖洗。灑漏:用碳酸氫鈉中和。
- 茚三酮
- 刺激性。戴手套。茚三酮灑在皮膚上時,不會立即顯現出來。它會慢慢地使皮膚染成紫色,甚至似乎可以穿透手套。經常洗手以去除它。
- 熱烘箱;也會產生丁醇氣體。
- 戴上手套取出紙張,或使用鑷子。通風區域。