超級馬里奧64 DS/可玩角色
超級馬里奧64 DS最大的改變是除了馬里奧之外，還增加了三個新角色：路易吉、瓦里奧和耀西。這四個角色不僅擁有不同的特殊能力和能力提升，而且某些角色對於某些星星任務是必須的。
在開始遊戲時，你將以耀西的身份開始遊戲，因為馬里奧、路易吉和瓦里奧被鮑澤和他的軍隊抓獲並關押在碧奇的房間裡。你需要找到相應的鑰匙來解鎖他們的角色。一旦你做到了，你就可以透過進入他們被鎖定的房間來切換角色。要切換回耀西，你必須讓角色重新進入他們被鎖定的房間。
馬里奧是這群人中不幸的英雄，他的控制方式與他在超級馬里奧64中的控制方式幾乎完全相同。他是四人中個子最矮的，但他的游泳、速度、力量和跳躍能力在所有方面都恰好是平均的。
- 能力提升
馬里奧是唯一一個可以從紅色開關方塊中獲得兩種能力提升的角色：超級花和羽毛。他的超級花能力使他膨脹成氣球。按下B鍵可以幫助他向上漂浮，而按下R鍵會立即將馬里奧縮回正常大小。羽毛給了馬里奧翅膀帽，這使他能夠飛行。馬里奧可以透過三級跳或從炮筒裡射出自己來騰空。他的飛行控制反向，這意味著按下向上鍵會讓他向下移動，反之亦然。耀西必須前往庫巴戰鬥，到達頂部，並與庫巴王戰鬥以救出馬里奧。
- 牆壁踢
牆壁踢是在空中撞到牆壁，然後從牆壁上跳開以將自己從牆壁上彈開。朝牆壁跑去，按下B鍵跳入空中，然後在馬里奧到達牆壁時再次按下B鍵，以從牆壁上向相反方向跳開。如果兩堵牆靠得很近，馬里奧可以透過連續的牆壁踢爬到頂部。
力量 - 3/3
速度 - 3/3
游泳 - 3/3
跳躍 - 3/3
馬里奧的第二號人物是他的弟弟，雙胞胎哥哥路易吉。他需要抓一些星星，還有瓦里奧。他是四人中第二高的跳躍者（但也是最好的），但攻擊力略低於馬里奧和瓦里奧。路易吉幾乎和他的哥哥一樣平均，除了跳躍之外。他略微弱的原因是他搬運敵人時移動速度較慢，而且身體更瘦，但扔出的距離相同。除此之外，他們的能力是相等的。他是最好的，速度最快的跑步者和游泳者。馬里奧必須前往大幽靈的鬼屋，然後進入路易吉的畫作，並與庫巴王（錯誤地稱為大幽靈）戰鬥以救出他的兄弟。
- 能力提升
路易吉獲得了在超級花的作用下隱身的能力。它將允許他穿過某些型別的牆壁，敵人會直接穿過他，類似於原作中的隱身帽。但他不能穿過冰。
- 後空翻
所有角色都可以透過按住R鍵蹲下並按下B鍵向後跳躍來執行後空翻。路易吉的後空翻不僅是最高的，而且他還以旋轉跳躍緩慢下降。它對跨越大型空隙很有用。
- 水上跑
在朝水體奔跑時按住Y鍵，路易吉將能夠在幾秒鐘內衝過水面，因為他身體輕盈。從跳躍中落地或停止會使路易吉掉入水中。
- 疾馳
在跳躍時按住B鍵，路易吉可以踢腿以獲得一點額外的距離。他只能在單跳或雙跳時這樣做。他和他的兄弟的跳躍距離更遠，三級跳的高度比耀西高，與瓦里奧的高度持平。
力量 - 3/3
速度 - 3/3
游泳- 3/3
跳躍- 3/3
馬里奧貪婪的反義詞對手瓦里奧也被邀請參加碧奇城堡，並且像路易吉一樣需要獲得星星。他的力量和體重真的太棒了，他也是最堅強的，但他的跳躍非常短，跑步和游泳非常糟糕。在火海中打敗鮑澤後，路易吉必須前往二樓，獲得超級花穿過鏡子，然後進入瓦里奧的畫作。在那裡，他必須與奇利酋長戰鬥以救出瓦里奧。
- 能力提升
瓦里奧的身體在超級花的作用下被金屬覆蓋，類似於原作中的金屬帽。他可以撞到一些敵人，並且不會受到他們攻擊的傷害，就像隱身的路易吉一樣。他的額外重量使他能夠在水下行走並抵抗強風和水流。他的身高與路易吉持平。
- 超強力量
瓦里奧是唯一一個能夠打破黑色磚塊以及其他某些堅固的大型物體（其他人無法打破）的角色。他的力量還使他能夠以最遠的距離擊打、踢擊和扔出敵人，以及用地面猛擊釘子一次而不是三次。在VS.模式下，他可以擊暈對手更長時間，抓住、旋轉並扔出他們，就像鮑澤是如何被打敗的那樣。他可以抓住並扔出標誌，並用地面猛擊他們一次，而其他人則用地面猛擊他們兩次。他的身高與路易吉持平。
力量 - 3/3
速度 - 3/3
游泳 - 3/3
跳躍 - 3/3
這隻可愛的綠色恐龍是馬里奧和路易吉的童年夥伴，也是你控制的第一個預設角色。他是四人中跳躍最高的，但他不能擊打/踢或抓住敵人和物體，他的地面猛擊無法打敗/破壞磚塊或幽靈。他擁有平均的跑步和游泳能力。他比其他人高。
- 能力提升
在超級花的作用下，耀西的嘴巴充滿了熱量。按下A鍵會使他撥出火焰。他的火焰吐息會融化大多數敵人，以及一些其他人無法打破的冰塊（用於兩個任務，一個用於雪人之地，另一個用於酷酷山）。
- 吞食敵人
A鍵不是用來擊打，而是用來讓耀西伸出舌頭。如果敵人被他的舌頭抓住，他就會將其縮回嘴巴里。再次按下A鍵會吐出敵人，而按下R鍵會吞下敵人，導致耀西產下一個會跟著他的蛋。要將蛋扔向目標，按下A鍵。耀西也可以吞食火焰並吐出火焰，但他一次只能儲存一團火焰。並非所有敵人都可以被轉化為蛋，甚至無法被吞食。
- 滑翔跳
在跳躍時按住B鍵，耀西可以用滑翔跳獲得更多空中時間。它不僅比路易吉的疾馳持續時間更長，而且還讓他能夠獲得額外的高度來到達遙遠的高處。他只能在單跳或雙跳時執行此操作。
力量 - 3/3
速度 - 3/3
游泳 - 3/3
跳躍 - 3/3