蛋白質組學/蛋白質分離 - 電泳/等電聚焦
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在等電聚焦中，蛋白質根據其等電點 (pI) 在 pH 梯度中透過電泳分離。在凝膠中產生 pH 梯度，並在凝膠上施加電勢。在除等電點以外的所有 pH 值下，蛋白質將帶電。如果它們帶正電，它們將向凝膠的負極移動，如果它們帶負電，它們將向凝膠的正極移動。在等電點，由於蛋白質分子不帶淨電荷，因此它們會積累或聚焦成一個清晰的條帶。
固定 pH 梯度用於 IEF，因為固定的 pH 梯度在非常高的電壓下在長時間執行中保持穩定。IPG 的 pH 梯度是透過將緩衝化合物共價結合到聚丙烯醯胺凝膠中而產生的。IPG 是帶有塑膠背襯片的鑄造條，並在不同的 pH 範圍內和長度上商購獲得。它們提供高解析度、高重現性和允許高蛋白質負載。等電聚焦在用於提取或溶解蛋白質的相同溶液中進行。帶有蛋白質樣品的 IPG 條必須在再水化/樣品緩衝液中再水化，在此期間蛋白質樣品被載入到條中。再水化可以是主動的或被動的。為了載入更大的蛋白質，在小電壓下應用主動再水化。當樣品進行電泳時，蛋白質將根據電荷向陽極或陰極移動。當蛋白質到達其各自的 pI 時，它們會停止移動。在 IEF 電池中執行後，蛋白質會根據其等電點在條帶上聚焦成條帶。聚焦的條帶可以冷凍儲存。