蛋白質組學/蛋白質分離 - 色譜/二維 (2D) 色譜
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分離高度複雜的混合物可能是一項非常困難的任務。混合物可以根據其分子量、化學成分、功能和結構進行分離 (Res 5)。單一色譜實驗可能無法有效地分離我們感興趣的蛋白質。在二維色譜中，不同的技術本質上是組合在一起以實現更高程度的分離。這可以透過離線技術來完成，其中一次色譜的結果被手動注入到第二次柱色譜中，或者透過線上方法，其中兩個色譜柱透過開關直接耦合。 (Ref 6).
二維色譜被認為是二維電泳的補充。雖然二維電泳根據等電點和大小分離蛋白質，但二維色譜可以使用許多不同的特性組合進行分離。二維色譜有多種型別，包括
- 多維蛋白質識別技術 (Mud-PIT)
多維蛋白質識別技術 (MudPIT) 是一種分離技術，它利用兩種色譜技術背靠背，並且可以與二氧化矽毛細管耦合 (Res1)。通常，色譜柱 由強陽離子交換劑 (SCX) 和反相 (RP) 材料組成。MudPIT 的優勢之一是帶展寬最小化，毛細管可以輕鬆地直接與質譜儀耦合。策略 最初涉及將蛋白質複合物變性為小肽。然後將樣品載入到強陽離子交換劑 (SCX) 色譜柱，隨後是反相色譜柱。毛細管可以設定為與質譜儀一起簡化流程。 來自 MudPIT 的二維圖
- 親和反相
- 尺寸排阻色譜 - 反相
- 尺寸排阻色譜 - 離子交換色譜
- 離子交換色譜 - 反相
二維色譜作為二維電泳的替代方案正變得越來越受歡迎 (Res 2)。它非常適合分離具有更極端 pI 範圍或更大分子量範圍的蛋白質。二維色譜的一個很好的優勢是它可以與質譜儀直接耦合。在電泳中，必須從凝膠中切割樣品以進行回收。
下面顯示了利用二維色譜的設定示例
- 化學學會網路 MudPIT
- GE Healthcare - 如何組合純化步驟 || 多維液相色譜
- MudPIT 頁面
- 貝克曼庫爾特 ProteomeLabTM 蛋白質分離系統
- 聚合物標準服務 二維液相色譜入門
- Kislinger T, Emili A. 多維蛋白質識別技術：現狀和未來展望。 專家蛋白質組學評論。 2005 年 1 月；2(1):27-39。*
- Venkatramani CJ, Zelechonok Y. 二維分離：概念和前景 J 色譜法 A。 2005 年 2 月 25 日；1066(1-2):47-53。
- Link AJ, Eng J, 等。 使用質譜法直接分析蛋白質複合物。 Nat Biotechnol。 1999 年 7 月；17(7):676-82。
- Paoletti AC, 等 多維蛋白質識別技術的原理和應用。 專家蛋白質組學評論。 2004 年 10 月；1(3):275-8。*
- Takahashi N, 等 用於分離極其複雜的肽混合物的自動化串聯高效液相色譜系統。 J 色譜法。 1985 年 6 月 19 日；326:407-18。
- Venkatramani CJ, 等 具有混合模式固定相的二維液相色譜。 J 色譜法 A。 2005 年 2 月 25 日；1066(1-2):47-53。
- Franktisek Svec 二維高效液相色譜 *
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