結構生物化學/克隆技巧
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克隆過程中的一些一般性考慮因素可以提高克隆效率。以下是一些技巧：
1. 應該直接純化用適當的限制性內切酶消化的 DNA 插入片段/PCR 產物和載體，或者從瓊脂糖凝膠中純化。這去除了不感興趣的引物或限制性片段。
2. 在進行連線時，應該測試插入片段與載體的比例以找到最佳條件。通常，1:1 或 3:1 的比例效果很好。
3. 篩選含有插入了感興趣 DNA 的載體的正確克隆非常重要。應用常見的篩選方法，例如 β-半乳糖苷酶活性的藍白篩選和抗生素篩選。
4. 小牛腸鹼性磷酸酶是一種水解酶，負責從核苷酸、蛋白質等中去除磷酸基團。這種酶可以在用限制性內切酶消化後使用。
5. 連線需要 ATP。
6. 酶用於以受控的、通常是確定的方式合成、降解、連線或去除核酸的部分。
7. 克隆酶，是核酸克隆程式中重要的酶。一些克隆酶用作連線酶、激酶和磷酸酶，以及 RecA 蛋白。
8. 當使用具有抗生素抗性特性的載體進行選擇時，在轉化細胞後，讓細胞在適當的培養基和培養溫度下生長几個小時，可以提高生長效率和抗生素抗性。這將允許成功攝取克隆載體的細胞在接種到抗生素處理的培養皿中後更容易收集。溶液中的初步生長階段將刺激細胞活性，從而產生抗生素抗性特性。
9. 當使用具有相似抗生素選擇的多個克隆的 DNA 載體時，交叉汙染是一個令人擔憂的問題。清洗、用乙醇處理和火焰滅菌儀器是必須認真採取的重要防交叉汙染措施。
10. 無菌操作技術。