結構生物化學/酶催化機制/EcoRI

概述

大腸桿菌 (EcoRI) 是一種位於限制修飾系統中的核酸內切酶。EcoRI 也從大腸桿菌菌株中分離出來。EcoRI DNA 負責攜帶 fi+ 抗藥性轉移因子 RTFI 的大腸桿菌菌株的特異性。這是由於在識別序列內引入了兩個單鏈交錯。由於 EcoRI 酶被認為是最簡單的序列特異性 DNA 酶，因此它們非常適合研究蛋白質的 DNA 序列識別。也可以使用這種酶來比較兩種蛋白質與相同 DNA 序列的相互作用。

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它從大腸桿菌菌株中提取，是限制修飾系統的一部分。在分子生物學中，它被用作限制性內切酶，它產生帶有 5' 末端突出端的粘性末端。酶切割的核酸序列為 GAATTC，互補序列為 CTTAAG。EcoRI 被廣泛用於各種分子遺傳技術，包括克隆、DNA 篩選和體外刪除 DNA 部分。像 EcoRI 這樣的產生 DNA 粘性末端的限制性內切酶通常用於在連線之前切割 DNA，因為粘性末端使連線反應更有效。EcoRI 可以表現出非位點特異性切割，稱為星形活性，具體取決於反應中存在的條件。使用 EcoRI 導致活性的條件包括低鹽濃度、高甘油濃度、反應中存在的酶過量、高 pH 值以及某些有機溶劑的汙染。已經開發出一種在大規模生產中高產分離大腸桿菌 RI 核酸內切酶的方法。純化後的酶是均質的，如聚丙烯醯胺凝膠電泳和分析沉降所示。

參考文獻

1. Modrich, Paul 和 Donna Zabel。EcoRI 核酸內切酶：均質酶的物理和催化特性。美國：生物化學雜誌，1976 年 3 月 2 日。PDF。