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結構生物化學/酶催化機制/HindIII

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HindIII 是一種 II 型限制性內切酶,來源於流感嗜血桿菌。HindIII 是位點特異性的,當存在輔助因子 Mg2+ 時,透過水解切割 DNA 序列 AAGCTT。這種序列的切割會導致 5' 粘性末端。

5'-A |A G C T T-3'

3'-T T C G A| A-5'

這種 II 型限制性內切酶由四個 β-摺疊和一個 α-螺旋組成。作為 II 型限制性內切酶,HindIII 保護宿主基因組免受外來 DNA 的侵害。

提議的機制和用法

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HindIII 首先透過氫鍵和較弱的力(如範德華力)與 DNA 骨架結合。當到達特定序列時,有人提出 HindIII 透過 Lys-92 穩定親核水,同時離去氫氧根陰離子被 Asp90 穩定來水解 DNA。

作為 II 型限制性蛋白,HindIII 的作用在於它在非常特定的位點切割 DNA,不同於 I 型,I 型在特定位點以外的位點隨機切割。因此,HindIII 用於基因工程和分子生物學。它可以新增、刪除或改變特定基因,這在試圖改變生物體的基因組時非常重要。

它是一種從流感嗜血桿菌中分離出來的 II 型位點特異性脫氧核糖核酸酶限制性內切酶,在輔助因子 Mg2+ 的存在下,透過水解切割回文 DNA 序列 AAGCTT。這種序列在 AA 之間的切割會導致 DNA 上稱為粘性末端的 5' 突出。

參考文獻

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Tang, D 等人。(2000)。“限制性內切酶 HindIII 突變體 E86K 的突變分析,該突變體具有更高的活性並改變了特異性”。蛋白質工程 Horton,N.,Newberry,K. Perona,J. (1999)。“II 型限制性內切酶中金屬離子介導的底物輔助催化”。美國國家科學院院刊。

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