結構生物化學/組織學
它是什麼?
它是研究動植物組織的學科。組織學家通常使用組織(即專門細胞群)並促進將染色劑應用於這些組織,以便在切片後對其進行研究。通常有兩種型別的組織切片製備方法。通常,人們可以冷凍組織,然後將其切片成 30-60 微米,或者使用“石蠟包埋”方法,在這種方法中,將熱蠟澆注在目標組織上並模塑成一個塊。然後使用切片機對該塊進行切片,得到的組織通常更薄。
歷史
馬切洛·馬爾皮基是羅伯特·胡克(發現細胞的科學家)的同代人,他被認為是第一位組織學家。他能夠使用 17 世紀的古老顯微鏡來研究組織的結構和組成部分。然而,另一位名為瑪麗·弗朗索瓦·比夏的科學家在馬爾皮基之後引入了“組織”一詞,併為許多細胞協同工作以實現特定功能奠定了框架。有些人認為比夏是現代動物組織學之父。在現代,組織學家通常只收集四種主要型別的組織,包括結締組織、上皮組織、肌肉組織和神經組織。直到比夏去世後,“組織學”一詞才開始傳播。組織學源於兩個希臘詞,Histo 意為組織,logo 意為研究。然而,有些人認為魯道夫·馮·柯立克是組織學的真正創始人,主要是因為他在建立實際教科書並強調組織方面的工作,這本書名為“組織學手冊”。
組織固定
是科學家阻止酶活性並以其最自然狀態儲存組織的方法。固定劑(組織固定中使用的化學物質)通常有毒,並且可以對細菌和寄生蟲進行一段時間的消毒。然而,如果在固定組織時過度接觸某些固定劑,可能會導致蛋白質被掩蓋,從而掩蓋表位。通常,組織是透過浸泡或灌注固定方法固定的。為了做到這一點,將甲醛溶解在水中使用。也可以使用多聚甲醛。
冷凍
對於保持組織成分和研究部位的完整性是必要的。然而,由於許多組織含有水,必須使用另一種溶劑將水驅除,以免在冷凍時損壞組織。這可以透過使用蔗糖作為溶劑/培養基來實現。就像滲透作用一樣,隨著組織外蔗糖濃度的增加,水將從組織中湧出以使溶液達到平衡。這個過程被稱為冷凍保護。
切片
切片方法因實驗室而異,一些實驗室使用石蠟技術,而另一些則使用冷凍方法。
冷凍切片法
在製備樣品之前,必須將樣品放置在蔗糖溶液中大約一兩天,以便透過滲透作用將水驅除出去。對目標組織進行解剖後,必須對組織的一部分進行切片,並將其放置在一個容器中。然後將組織冷凍培養基應用於容器,並將樣品放置在其中。然後在乾冰下進行冷凍,然後再次放置一層組織冷凍培養基,以便覆蓋整個容器。讓培養基冷凍約半小時後,進行方形切割。然後將冷凍切割放置在安裝盤上,並再次塗抹組織冷凍培養基,以便將樣品安裝到該盤上。完成此操作後,將安裝盤安裝到切片機或冷凍切片機上,然後就可以開始切片了。將安裝盤安裝到冷凍切片機上後,將刀片應用於切片。然而,首先必須對樣品進行對齊,以便切割以平面方式進行。根據使用者想要獲得切片的方式,切割可以以各種方式進行。
參考資料
圖辛斯基實驗室 - UCSD