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結構生物化學/核酸/RNA/RNA 純化

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RNA 在基因表達中扮演著多種角色,從信使、催化到調節。例如,在大腸桿菌中,80% 的 RNA 是核糖體 RNA,15% 是轉移 RNA,只有 5% 是信使 RNA。信使 RNA 是蛋白質合成的模板。由於 mRNA 的含量相對較少,必須進行親和層析以純化它。

這種技術利用了 mRNA 的結構,它在 3' 端被聚腺苷酸化以形成聚 A 尾巴。聚(A)n 可以透過氫鍵與互補鹼基聚(T)n 配對。聚(A)區域用於透過親和層析從其餘 RNA 中選擇性分離 mRNA。只有帶有聚 A 的 mRNA 才能被柱中的聚 T 結合。缺乏聚 A 尾巴的 RNA 在高鹽濃度下從柱中洗脫出來。mRNA 與其他 RNA 分離。然後可以透過新增低鹽洗脫緩衝液將聚(A)mRNA 從柱中洗脫出來。

親和層析對於 RNA 的純化和 cDNA 的合成非常有用。

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