結構生物化學/DNA重組技術/檢測特定基因

概述

基因組文庫是生物體所有基因的集合。建立基因組文庫後，通常需要從新建立的基因組文庫中篩選特定的基因。一種方法是進行菌落雜交實驗。

菌落雜交實驗

此技術用於篩選基於質粒的基因組文庫。篩選噬菌體噬斑。首先，透過使用噬菌體感染菌落來轉化細菌。將它們接種在培養皿中並孵育，以使噬菌體噬斑形成。在噬菌體所在的位置以及被細菌感染的位置，培養皿上都會出現具有相同噬菌體的噬斑。接下來，透過將硝酸纖維素膜放置在原始培養皿的頂部來複制原始培養皿。這使得噬斑能夠以一定的排列方式轉移。感染的細菌和噬菌體DNA都會從裂解的細胞中釋放出來，並附著在硝酸纖維素膜上形成斑點。然後用 2M NaOH 處理，使噬菌體裂解並分離 DNA 鏈。當 DNA 被 2M NaOH 處理而變性時，DNA 鏈更容易與 32P 探針雜交。接下來，必須中和培養皿，然後讓其乾燥以固定 DNA。然後將其與 32P 探針混合，並使其與硝酸纖維素膜上存在的任何 DNA 序列退火。然後將其置於 X 射線片上進行放射自顯影。斑點顯示出探針與 DNA 雜交的位置，並用它從原始培養皿上的噬斑中定位基因組克隆。