結構生物化學/酶/時間依賴性抑制
大多數抑制劑在與酶建立結合平衡時作用非常快。然而，緊密結合抑制劑在更慢的時間尺度上建立其平衡。因此，這些型別的抑制劑被稱為時間無關抑制劑，因為它們顯示出隨時間變化的初始速度變化。有四種類型的相互作用可以減慢抑制劑的動力學。第一個是當酶根本沒有抑制劑時。第二個相互作用是當平衡常數與抑制劑可逆時酶的週轉率相比非常小時。第三個相互作用是當抑制劑結合時，它形成一個 EI 複合物，然後異構化為形成一個新的複合物。這種新的複合物顯著抑制了反應，因此減慢了反應速度。第四個相互作用涉及不可逆抑制劑，它們可以作為酶的親和標記，因此根據其機制減慢反應速度。時間依賴性抑制劑的兩個例子是絲氨酸蛋白酶和前列腺素 G/H 合成酶。
確定可逆性涉及執行大量稀釋、透析、過濾結合或尺寸排阻色譜。為了區分共價失活和非共價抑制，重要的是能夠判斷抑制劑在酶變性時是否被釋放。例如，如果有一個共價抑制劑並且它被變性，那麼由於抑制劑和酶之間的共價鍵，抑制劑仍然會與變性蛋白結合。但是，如果抑制劑是非共價的，那麼酶的活性位點會將抑制劑釋放到變性溶液中。
Copeland, Robert A. Enzymes. Wiley-VCH, Inc., 2000. 318-34.