結構生物化學/核酸/DNA/DNA變性
當DNA溶液被加熱到足夠高的溫度時,雙鏈DNA會解開,並且將兩條鏈連線在一起的氫鍵會減弱,最終斷裂。將雙鏈DNA分解成單鏈的過程被稱為DNA變性或DNA變性。DNA鏈半變性,即一半為雙鏈,一半為單鏈的溫度稱為熔點(Tm)。鏈分離或熔化的程度透過DNA溶液在260nm處的吸光度來衡量。核酸由於其鹼基中的電子結構而在該波長處吸收光,但當兩條DNA鏈結合在一起時,兩條鏈中鹼基的緊密接近會抑制部分吸光度。當兩條鏈分離時,這種抑制消失,吸光度升高30%-40%。這被稱為增色效應。減色效應是雙螺旋中堆疊鹼基吸收較少紫外線的現象。
透過使用DNA變性,也可以檢測兩個不同DNA序列之間的序列差異。將DNA加熱並變性成單鏈狀態,然後將混合物冷卻以允許鏈重新雜交。在相似的序列之間形成雜合分子,並且這些序列之間的任何差異都會導致鹼基配對的破壞。
雖然生物體DNA中G(鳥嘌呤)與C(胞嘧啶)以及A(腺嘌呤)與T(胸腺嘧啶)的比率是固定的,但DNA的GC含量(G+C的百分比)在不同DNA之間可能存在很大差異。DNA的GC含量的百分比對其Tm有顯著影響。因為G-C對形成三個氫鍵,而A-T對只形成兩個氫鍵,所以GC含量越高,其Tm就越高。因此,富含G和C的雙鏈DNA比富含A和T的雙鏈DNA需要更多的能量才能斷裂,這意味著更高的熔點(Tm)。在Tm以上,DNA會變性,在Tm以下,DNA會退火。退火是變性的逆過程。
熱變性有一個方面從未討論過。用來使這種變性發生的熱量沒有特定的方向,因此是一個標量。然而,解開雙螺旋涉及解旋,而解旋有方向,因此是一個向量。問題是:標量如何引起向量變化?
加熱並不是使DNA變性的唯一方法。有機溶劑,如二甲基亞碸和甲醯胺,或高pH值,也會破壞DNA鏈之間的氫鍵。低鹽濃度也會透過去除穩定兩條鏈之間的負電荷的離子來使DNA雙鏈變性。
雙螺旋變性的核心問題仍然存在。氫鍵斷裂後,兩條鏈,通常包含許多圈,甚至幾百圈,是如何真正實現鏈分離的?
另一個主要困難在於,將熱量施加到核酸懸浮液中相當於施加一個標量,因為以這種方式施加的熱量沒有方向。然而,解開鏈需要一個角力,而角力是一個向量,因為它有一個特定的方向。從未解釋過標量(熱量)如何引起向量變化(旋轉)的溶液。世界上根本沒有足夠的科技和智慧來解釋這一點。
這些問題的解決方案是由側邊模型提供的,在這些模型中,鏈之間沒有淨纏繞。