蛋白質組學/蛋白質分離- 電泳/QPNC-PAGE
定量製備性天然連續聚丙烯醯胺凝膠電泳 (QPNC-PAGE) 是一種電泳技術，用於分離生物樣本中的天然或活性金屬蛋白，並解決複雜蛋白混合物中正確和錯誤摺疊的金屬輔因子蛋白。一些金屬蛋白的例子包括金屬伴侶蛋白、朊病毒、金屬轉運蛋白、澱粉樣蛋白、金屬酶和金屬肽。
凝膠在室溫下聚合 69 小時。這導致形成機械穩定的、均勻的、無單體或自由基的凝膠，因此凝膠與生物分子之間的相互作用可忽略不計。金屬蛋白在電泳過程中不會解離成金屬輔因子和脫輔基蛋白，並且純化的金屬蛋白以定量的方式分離在不同的 PAGE 組分中。由於凝膠的特殊特性，分離後的蛋白質的構象或活性結構不會受到這種方法的影響。
可以使用尺寸排阻色譜法研究和確認特定金屬蛋白的化學穩定性。
用於電泳的緩衝液包含 20 mM Tris-HCl、1 mM NaN3，pH 值為 10。由於凝膠和緩衝液溶液的特殊特性，樣品中的大多數蛋白質帶負電荷，在電場中從陰極遷移到陽極。蛋白質透過生理緩衝液溶液連續洗脫，並分離在不同的組分中。[1]
可以透過質譜法鑑定和量化在不同 PAGE 組分中洗脫的金屬輔因子。由於純金屬蛋白在非變性條件下分離，因此可以透過溶液 NMR 光譜法獲得這些蛋白質的結構。
金屬蛋白的錯誤摺疊會導致阿爾茨海默病等退行性疾病。生物流體中金屬伴侶蛋白的定量分析有助於對這些蛋白質錯誤摺疊疾病中具有生物活性的金屬輔因子蛋白的結構-功能關係進行臨床研究。[2] QPNC-PAGE 與生物質量和 NMR 光譜法相結合，提供了有關生物系統中重要金屬輔因子代謝的寶貴資訊。
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- ^ Kastenholz, Bernd; Garfin, David E. (2010 年 7 月 6 日). "透過 QPNC-PAGE 分離酸性、鹼性和中性金屬蛋白". 自然先驅. doi:10.1038/npre.2010.4617.1.
- ^ Kastenholz, Bernd (2007). "阿爾茨海默病診斷和治療的新希望". 蛋白質與肽通訊. 14 (4): 389–393. doi:10.2174/092986607780363970. PMID 17504097.