蛋白質組學/蛋白質分離 - 色譜法/疏水相互作用色譜法 (HIC)

章節作者：Laura Grell 和 Alexander Butarbutar
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章節修改者：Kai Burnett 和 Dalia Ghoneim
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疏水相互作用色譜法 (HIC)

圖 1. 常見的 HIC 固定相分子 RIT 離子交換網站

   疏水相互作用色譜法是一種利用疏水性分離蛋白質的色譜技術。在這種色譜法中，苯基、辛基或丁基等疏水基團被連線到固定相柱上。透過色譜柱的蛋白質，如果其表面具有疏水性氨基酸側鏈，則能夠與色譜柱上的疏水基團相互作用並結合。

   HIC 分離通常設計為與離子交換色譜法中使用的條件相反。在這種分離中，最初將高離子強度的緩衝液（通常為硫酸銨）施加到色譜柱。緩衝液中的鹽降低了樣品溶質的溶劑化，因此隨著溶劑化的降低，暴露的疏水區域被介質吸附。

圖 2. 該圖說明了鹽濃度增加如何導致強制疏水相互作用

(Res1)。分子疏水性越強，促進結合所需的鹽濃度就越低 (Res1)。為了洗脫蛋白質，逐漸降低鹽濃度，以增加疏水性的順序洗脫結合的物質。此外，也可以透過使用溫和的有機修飾劑或去汙劑來實現洗脫 (Res1)。

固定相被設計為與其他分子形成疏水相互作用。這些相互作用在水中太弱了。然而，在緩衝液中新增鹽會導致疏水相互作用。以下列出了鹽濃度增加疏水相互作用的順序，按其增強相互作用的能力排序：

1. Na₂SO₄
2. K₂SO₄
3. (NH₄)₂SO₄
4. NaCl
5. NH₄Cl
6. NaBr
7. NaSCN

雖然反相色譜法和疏水相互作用色譜法非常相似，但反相色譜法中的配體比疏水相互作用色譜法中的配體疏水性更強。這使得疏水相互作用色譜法能夠使用更溫和的洗脫條件，這些條件不會像反相色譜法那樣破壞樣品。

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資源

1. Bio-Rad 疏水相互作用 & 產品
2. GE Healthcare 疏水相互作用色譜動畫 || 疏水相互作用和產品介紹