蛋白質組學/蛋白質分離 - 色譜法/固定化金屬離子親和層析 (IMAC)
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章節作者：Laura Grell 和 Alexander Butarbutar
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章節修改者：Kai Burnett 和 Dalia Ghoneim
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固定化金屬離子/金屬螯合親和層析是一種分離技術，其基於蛋白質和金屬離子之間的配位共價鍵合。蛋白質具有多種氨基酸組成，這實際上產生了對金屬離子的不同親和力範圍。但是，很少有天然存在的蛋白質對金屬離子具有親和力，因此該技術主要用於純化重組蛋白。例如，蛋白質可以被設計成包含一個多組氨酸尾部（組氨酸通常可以作為二價金屬陽離子的配體）。如果固定相固定了二價金屬陽離子，則可以根據蛋白質與金屬離子的相互作用能力分離蛋白質混合物。那些含有較多組氨酸殘基的蛋白質比那些含有較少組氨酸殘基的蛋白質能更緊密地結合到柱子上。
已經開發了幾種不同型別的固定化金屬離子柱來分離各種蛋白質（例如 Fe、Co、Cd、Ni 或 Zn）。IMAC 中的蛋白質分離通常取決於金屬離子-蛋白質鍵的強度。因此，選擇固定化離子的型別對於成功的蛋白質分離至關重要。迄今為止，最廣泛使用的方法是使用固定化鎳柱，並在感興趣的重組蛋白上設計六個或更多個殘基的多組氨酸標籤。要記住的一點是，金屬離子與蛋白質之間的結合必須是可逆的，以便在後續步驟中洗脫結合的蛋白質。三種不同的洗脫策略可應用於 IMAC 競爭性洗脫、剝離洗脫和 pH 調節 (Ref1).
- Affiland 固定化金屬離子親和層析 (IMAC)
- GE Healthcare 固定化金屬離子親和層析產品
- 默克 使用觸角凝膠的金屬螯合親和層析
- 伯樂 Profinity IMAC 樹脂
- Paunovic. I, Schulin. R, Nowack, B. 固定化金屬離子親和層析在天然 Cu 配體分級中的應用，Journal of Chromatography A，1100 (2005) 176–184. *
- Yip TT, Hutchens TW. 固定化金屬離子親和層析。 Methods Mol Biol. 2004;244:179-90.
- Sun X, Chiu JF, He QY.固定化金屬親和層析在蛋白質組學中的應用。 Expert Rev Proteomics. 2005 年 10 月；2(5)：649-57. *
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