蛋白質組學/蛋白質分離 - 色譜法/固定相和流動相
章節作者：Laura Grell 和 Alexander Butarbutar
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章節修改人：Kai Burnett 和 Dalia Ghoneim
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色譜分離包括固定相和流動相。在蛋白質混合物中，目標分子與固定相相互作用，而混合物中的其他蛋白質保留在流動相中。顧名思義，流動相移動並從系統中流出。目標蛋白已成功分離。下一步是從固定相中去除目標蛋白並將其轉移到流動相中。這可以透過洗脫目標分子來實現。
流動相可以是液體或氣體。氣相色譜法在分析化學中得到廣泛應用。它在蛋白質組學中的應用較少，因為該技術需要高溫，而高溫通常不適合蛋白質組學中涉及的大聚合物。氣相色譜法依賴於固體固定相和氣體流動相之間的分配平衡。氣相色譜法幾乎總是使用管子進行。固定相通常由填充在附著在毛細管上的柱子中的固體珠組成。
在蛋白質組學中，更有用的流動相是處於液態的流動相。本章中討論的所有技術都涉及液相色譜法。在這種技術中，傳統上存在固體固定相和液體流動相之間的分配平衡。液相色譜法在柱中或平面上進行。
固定相幾乎總是固體，但是，有一些色譜實驗的例子表明固定相處於其他狀態。例如，在逆流色譜法 (CCC) 中，流動相和固定相都是液體。
固定相的形狀通常有兩種形式
- 平面色譜法
- 柱色譜法
這種色譜法涉及平面固定相。平面可以由一層紙或由玻璃板支撐的凝膠等物質組成。流動相擴散並被允許與平面相互作用。
在紙色譜法中，目標分子被放置在色譜紙上。流動相是一種溶劑。溶劑向上移動紙張。當它到達樣品時，溶劑會將其帶走。樣品的不同組分以不同的速率移動，從而將樣品分離成條帶。在薄層色譜法中，使用凝膠或二氧化矽基質代替紙張。這往往比紙色譜法提供更快的執行速度和更好的解析度。
柱色譜法可能是蛋白質組學中最常用的色譜法。固定相在柱中。柱通常由緊密堆積的珠基質組成。流動相進入柱並以恆定速度流出。該柱通常與檢測裝置（例如質譜儀）耦合。當樣品從柱中流出時，可以測量其吸收。這樣，任何在流動相中洗脫的蛋白質都可以被檢測到。
- 色譜法 on 維基百科
- 親和色譜分離機制。 GE Healthcare Life Sciences