結構生物化學/DNA重組技術/人工染色體/細菌人工染色體 (BAC)
細菌人工染色體,也稱為 BAC,是一種用於克隆目標 DNA 片段並植入細菌中的載體。載體是由 DNA 製成的。載體充當親本宿主,可以作為克隆基因的嚮導。細菌人工染色體可以像昆蟲一樣大。為了擴增基因,必須使用限制性內切酶從所需來源提取 DNA 序列,以切割載體和目標 DNA 並將其連線到宿主細菌中。細菌的質粒通常在克隆過程中起著至關重要的作用,因為它們也是由 DNA 製成的,並且可以與實驗基因相容。載體還包含複製起點,複製從載體位點開始並繼續進行附著樣本。
oriS,repE•F
- 複製質粒複製並調節複製數
parA 和 parB
- 在細胞分裂期間將 F 質粒 DNA 分配到子細胞中,並確保 BAC 的穩定維持
A 可選擇標記
- 因為一些 BAC 也在克隆位點具有 lacZ,用於藍白篩選,所以它用於抗抗生素
T7 和 Sp6
- 插入基因轉錄的噬菌體啟動子
BAC 在對轉基因小鼠進行實驗以研究遺傳疾病的影響時被廣泛用於模擬遺傳疾病。由於複雜的基因通常在編碼序列上游具有許多調控序列,包括許多控制基因表達水平的啟動子序列,因此 BAC 在該研究領域非常有用。當在小鼠身上進行測試時,BAC 能夠幫助研究神經系統疾病,例如阿爾茨海默病或唐氏綜合徵。BAC 最近也被用於研究與各種不同癌症相關的特定癌基因。BAC 透過電穿孔/轉化轉移到這些遺傳疾病模型中,這本質上是與相容病毒或微量注射的轉染。BAC 也被用於檢測感興趣的基因或大型序列,然後使用 BAC 陣列將其對映到人類染色體上。由於該過程能夠容納更大的序列而不會出現重排風險,因此它是此類遺傳研究的首選方法,並且比其他型別的克隆載體更穩定。
BAC 也可以作為大型 DNA 病毒以及 RNA 病毒的克隆。這些克隆被稱為“感染克隆”,因為將 BAC 構建體轉染到宿主細胞中足以啟動宿主中的病毒感染。BAC 中包含的傳染性特性有助於研究皰疹病毒、痘病毒和冠狀病毒等病毒。使用遺傳方法在細菌中對 BAC 進行突變和轉化,可以進行這些病毒的分子研究。
http://www.scq.ubc.ca/ 細菌人工染色體:大壞蛋 BAC
