GENtle/編輯引物對話方塊
外觀
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此對話方塊有助於最佳化引物。為此,將生成許多引物變體,並可以進行檢查。
對話方塊的中心線顯示引物的當前變體;該變體的詳細資訊顯示在右上角的框中。確定將結束對話方塊,將該變體提交到 PCR 模組。取消將結束對話方塊,並且不更改 PCR 模組。重置將使對話方塊中的引物恢復到最初啟動對話方塊時的變體。
對話方塊下半部分的列表包含一個自動生成的當前引物變體列表,按任意分數排序。變體的“區域”可以受對話方塊左上角區域中多個設定的影響。可用設定包括
- 引物 5' 端向左和向右的變異。
- 引物 3' 端向左和向右的變異。
- 引物的最小和最大長度。
- 引物的最小和最大熔解溫度。
更改這些設定中的任何一個都會觸發重新計算可能的變異。然後評估這些變異並在對話方塊下半部分的列表中顯示。雙擊其中一個變異將更改中心線上的當前變異,並在對話方塊右上角顯示屬性。
這將顯示
- 引物序列,方向為 5'→3'
- ΔH 和 ΔS 值
- 引物的長度和 GC 含量
- 熔解溫度,根據最近鄰方法計算(通常最佳結果,但僅適用於較長的引物)
- 熔解溫度,根據鹽調整方法計算(結果中等)
- 熔解溫度,根據 GC 方法計算(簡單化)
- 最高自退火評分(任意)以及該退火的顯示
- 注意:計算引物熔解溫度很棘手。如果三種方法中的一種給出的結果與其他兩種結果完全不同,請忽略它。此外,熔解溫度僅針對與序列退火的引物 3' 端計算!