跳轉到內容

GENtle/PCR 和引物設計

來自華夏公益教科書,開放的書籍,為開放的世界
GENtle 手冊

關於 - 常見問題解答 - 設定 - DNA - 蛋白質 - PCR 和引物設計 - 測序 - 比對 - 計算器 - 虛擬凝膠 - 影像檢視器 - 工具和對話方塊 - Web 介面 - 圖表和繪圖 - DNA 圖 - 序列圖 - 點圖 - 限制性識別

PCR 和引物設計。

此模組允許設計引物和執行虛擬 PCR。 它可以從 DNA 模組透過 DNA 或 [../Sequence map#Context menu|sequence]] 圖的上下文選單啟動,或者透過 工具/PCR 啟動。 如果在 DNA 模組中選擇了序列,則在 PCR 模組啟動時會自動生成一個或多個引物。 這些僅僅是粗略的建議,預設情況下不會進行任何最佳化。

工具欄

[編輯 | 編輯原始碼]
  • 輸入新的引物
  • 開啟引物/序列
  • 列印 PCR
  • 新增引物(您需要先開啟或輸入引物)
  • 匯出引物(生成其序列)
  • 編輯模式
  • 顯示/隱藏特徵
  • 聚合酶執行長度
  • 水平模式

聚合酶執行長度是指聚合酶在 PCR 延伸步驟中允許執行的核苷酸數量。 這通常以分鐘為單位測量,但每種聚合酶的執行速度都不同,這就是這裡提供核苷酸資訊的原因。 該值最初是自動計算的,但可以手動更改。

引物列表

[編輯 | 編輯原始碼]

引物列表(左上角)顯示了此 PCR 中使用的所有引物,以及這些引物的某些關鍵屬性。 選擇其中一個引物將在右側的框中顯示更詳細的資訊(有關詳細資訊,請參見 此處)。 雙擊其中一個引物將在序列中標記並顯示該引物。 可以透過 刪除 按鈕或 編輯 透過 編輯 按鈕刪除選定的引物。 也可以透過工具欄中的匯出按鈕匯出選定的引物; 將為該引物生成新的序列。

注意:生成的序列不會自動儲存在任何地方,需要手動儲存!
注意:要新增引物,請使用工具欄中的新增按鈕,或使用 選擇作為新引物 上下文選單。 僅僅編輯序列(見下文)僅用於編輯現有引物,不會建立新的引物!

該序列由以下幾行組成

  • 模板 DNA 的特徵(可以在工具欄中關閉)
  • 5' 引物
  • 模板 DNA(5'→3')
  • 模板的氨基酸序列
  • 模板 DNA(3'→5')
  • 3' 引物
  • 所得 DNA 的限制性位點
  • 所得 DNA(以綠色顯示)
  • 所得 DNA 的氨基酸序列

PCR 序列顯示的一些特殊功能和屬性

  • 可以按照 此處 所述設定氨基酸讀碼框。 這將影響顯示的兩個氨基酸序列(模板和結果)。
  • 只有兩個引物序列可以編輯; 必須使用覆蓋模式,並且停用刪除。
  • 要刪除核苷酸,請使用以下方式覆蓋它空格.
  • .” 鍵會將匹配的模板核苷酸複製到引物序列中的該位置。
  • 匹配的引物核苷酸(即與模板匹配的)以藍色顯示,錯配以紅色顯示。
  • 如果(在編輯模式下)選擇了引物序列的空跨度,則可以透過上下文選單(選擇作為新引物)將其變成新的引物。
  • 可以透過上下文選單在選擇(在編輯模式下,游標的右側或左側)的左側或右側插入限制性位點的序列。 將出現用於所需酶的選擇對話方塊。
  • 可以透過上下文選單引入 沉默突變

最後,可以透過上下文選單將所得 DNA 或氨基酸序列(綠色序列,將是 PCR 生成的序列)複製到剪貼簿或生成新的序列(包含所有特徵、限制性酶等)。

華夏公益教科書